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液氮对于菌种细胞的冷藏保存处理

液氮对于菌种细胞的冷藏保存处理

分类:
气体知识
发布时间:
2020/02/21 16:24
液氮,液态的氮气。是惰性的,无色,无臭,无腐蚀性,不可燃,温度极低。氮构成了大气的大部分(体积比78.03%,重量比75.5%)。氮是不活泼的,不支持燃烧。液氮超低温保藏就是将菌种密封在有保护剂的安瓿管内,经控制速度冻结后,在-150℃~-196℃液态氮超低温罐中保藏。
液氮罐
液氮罐
1.菌种制备
保藏孢子时,取孢子制成悬液,加入保护剂,装入无菌安瓿管内。保存菌丝体时,用液体振荡法培养菌丝球,或用平板培养菌丝体,也可用麦粒菌种。取适量放入无菌的装有保护剂的安瓿管内。
 
2.安瓿管
制作安瓿管的玻璃,要具有经受温度突变而不破裂、容易用火焰熔封管口、恢复培养时容易打开的特点。一般采用硼硅玻璃,管的大小根据需要而定,通常是75毫米×10毫米或能容1.2毫升液体的安瓿瓶比较合适。选好安瓿管后,每管加进0.8毫米保护剂,塞上棉塞,在1千克/平方厘米压力下灭菌15分钟,供冻结琼脂菌丝片或麦粒菌种用。如冻结孢子悬液时,则空管灭菌。
液氮杜瓦罐
液氮杜瓦罐
3.保护剂
用体积比10%甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液作保护剂。
 
4.冻结保藏
将上述准备好的菌种以无菌操作移入加有保护剂的安瓿管中,用火焰将安瓿管上部熔封,浸在水中检查有无漏气。然后将封口的安瓿管放在慢速冻结器内,控制冻结速度,一般每一分钟降低1℃,使样品逐步均匀地冻结到-40℃。-40℃以下的冻结速度,可不用控制而迅速下降。安瓿管冻结后,立即放入山立牌液氮罐中。罐内的气相温度为-150℃,液体温度为-196℃。
液氮快易冷
液氮快易冷
5.恢复培养
需要使用保藏菌种时,将安瓿管从液氮罐中取出,立即放入33~40℃的水浴中振荡至管内冻结物全部融解,开启安瓿管,将管内菌种接入适宜培养基培养即可。早前常用的液氮罐的容积有10升、35升两种,也有更大的,如美国菌种保藏委员会(ATCC)使用的容积达250升和650升。常用的备用液氮罐容积为10~35升,也有100升的。由于液氮来源困难、液氮罐设备费用大,目前这种保藏方法还未广泛普及使用。
 
储存于阴凉、通风的库房。库温不宜超过30℃。储区应备有泄漏应急处理设备。密闭操作,提供良好的自然通风条件。操作人员必须经过专门培训,严格遵守操作规程。建议操作人员穿防寒服,戴防寒手套。防止气体泄漏到工作场所空气中。搬运时轻装轻卸,防止钢瓶及附件破损。配备泄漏应急处理设备。